用pluriBead分离和刺激B细胞

隔离

样品材料	50毫升EDTA全血
保温方法	无磁性，含300 µl CD19 S-pluriBeads®抗人抗体
产量	~3.5 * 10^6 B淋巴细胞
生命力	>99% (胰岛素蓝染色剂)
纯度测定	抗CD20 FITC抗体染色后进行FACS分析。
纯度	~97% B淋巴细胞

分析报告

抗原特异性记忆B细胞的频率测定。

靶点激活后，用ELISpot测定抗体分泌浆细胞（ASC）的丰度。

用多克隆活化混合物刺激分离的B细胞5天。然后将它们生长在涂有特异性抗原的平板上。孵育24小时后，进行测定。

这些斑点用专用软件（AID ELISpot6.0 iSpot）进行计数和评估。在相邻的图中，蓝色数字表示每口井的抗原特异性斑点数量。

Fig 1: 分离和刺激的B淋巴细胞的纯度。

Fig 2: ELISpot分析抗Ig特异性细胞一式两份。d1d2：250个细胞/孔，d3d4：500个细胞/孔，d5d6：非活化细胞（500个细胞/孔）。

Fig 3: d7d8: 抗流感核苷酸特异性记忆B细胞，d9d10：抗破伤风类毒素特异性记忆B细胞，d11d12：阴性对照。

评价/摘要

S-pluriBead® CD19可以从人类全血样本中分离出纯度为97%的B淋巴细胞。

分离出的靶点在胰蓝染色后显示出>99%的活力。它们成功地在细胞培养中生长，并分化为分泌抗体的浆细胞（ASCs）。通过ELISpot检测，发现ASCs适合于分析抗原特异性记忆B细胞的反应。结果与参考方法(Dynabeads® CD19 Pan B)的结果相当。

关于参考方法，见出版物: Bussmann BM, Reiche S, Bieniek B, Krznaric I, Ackermann F, Jassoy C: Loss of HIV-specific memory B-cells as a potential mechanism for the dysfunction of he humoral immune response against HIV. Virology 2010; 397(1):7-13.)