单核细胞分离成熟的树突状细胞与pluribead®

隔离

样品材料 10毫升人形水仙衣
隔离方法 使用280µl CD14 S-pluriBead®抗人类或300µl M-pluriBead®抗人类的非磁性材料。
产量 ~6 * 10^6 S-pluriBead® 或 ~12 * 10^6 M-pluriBead®
生命力 >92% (胰岛素蓝染色)
纯度 ~97%

单核细胞分离、分化和刺激方案

用提供的洗涤缓冲液(PBS + 0,05%BSA和2mM EDTA,pH值7,4)洗涤样品材料两次,以减少可溶性CD14。添加pluriBead CD14用于分离单核细胞到样品管中,并在pluriPlix或擦拭滚动混合器上孵育20分钟。

分离后,将细胞重悬于1ml RPMI 1640-medium(+10%FCS和1x Pen/Strep)中,并确定细胞数。对于单核细胞在24孔细胞培养板中的培养,每孔使用100万个细胞,并用1ml单核细胞-培养-培养液(RPMI 1640 + 10%FCS,1x Pen/Strep,2000 U/ml GM-CSF und 200 U/ml IL-4)在37℃和5%二氧 化碳下培养。

24h后,取出培养基,加入1ml新鲜的单核细胞-培养-介质。然后,再将细胞培养4天。共5天后,用100ng/ml LPS再刺激细胞24h。然后用胰蛋白酶去除活化的细胞,并通过CD1a、CD14和CD83的荧光分析来检测单核细胞成熟到腹膜细胞的速度。

数据

facs analysis of monocyte isolation for dendritic cells maturation

Fluorescent analysis of mature dentritic cells CD1a+Fluorescent analysis of mature dentritic cells CD14a+Fluorescent analysis of mature dentritic cells CD1a+
成熟腹膜细胞CD11a+、CD14+、CD83+的荧光分析。

CD14+ cells after isolation in culture+ Fluorescent analysis of mature dentritic cells CD14a+
CD14+细胞分离培养后,用GM-CSIF/IL-4培养5天后,用LPS刺激后,单核细胞成熟为树突状细胞。