| Probenmaterial | 50ml EDTA-Vollblut |
| Isolationsverfahren | Nicht-magnetisch mit 300 µl CD19 S-pluriBeads® anti-human |
| Ertrag | ~3.5 * 10^6 B-Lymphozyten |
| Vitalität | >99% (Trypanblau-Färbung) |
| Reinheitsbestimmung | Anti-CD20-FITC-Antikörper-Färbung mit anschließender FACS-Analyse |
| Reinheit | ~97% B-Lymhozyten |
Nach der Target-Aktivierung wurde die Häufigkeit von Antikörper sezernierenden Plasmazellen (ASC) mittels ELISpot bestimmt.
Isolierte B-Zellen wurden für 5 Tage mit einer polyklonalen Aktivierungsmischung stimuliert. Anschließend wurden sie auf einer mit dem spezifischen Antigen beschichteten Platte angezüchtet. Nach 24 h Inkubation wurde der Assay durchgeführt.
Die Spots wurden mit einer speziellen Software (AID ELISpot6.0 iSpot) gezählt und ausgewertet. Im nebenstehenden Diagramm geben die blauen Zahlen die Anzahl der antigenspezifischen Spots pro Well wieder.
Fig 1: Reinheit von isolierten & stimulierten B-Lymphozyten
Fig 2: ELISpot-Analyse von anti-Ig spezifischen Zellen in Duplikaten. d1d2: je 250 Zellen/Vertiefung, d3d4: je 500 Zellen/Vertiefung, d5d6: nicht aktivierte Zellen (je 500 Zellen/Vertiefung)
Fig 3: d7d8: Anti-Influenza-Nukleokapsid-spezifische Gedächtnis-B-Zellen, d9d10: nti-Tetanus-toxoid-spezifische Gedächtnis-B-Zellen, d11d12: Negativkontrolle
S-pluriBead® CD19 ermöglichte die Isolierung von B-Lymphozyten aus einer humanen Vollblutprobe mit einer Reinheit von ~ 97%.
Die isolierten Targets zeigten nach Trypanblau-Färbung eine Vitalität von >99 %. Sie wurden erfolgreich in Zellkultur gezüchtet sowie zu Antikörper-sezernierenden Plasmazellen (ASC) differenziert. ASCs erwiesen sich als geeignet für die Analyse der antigenspezifischen Gedächtnis-B-Zellantwort mittels ELISpot-Assay. Die Ergebnisse waren vergleichbar mit denen einer Referenzmethode (Dynabeads® CD19 Pan B).
Für die Referenzmethode siehe Publikation: Bussmann BM, Reiche S, Bieniek B, Krznaric I, Ackermann F, Jassoy C: Loss of HIV-specific memory B-cells as a potential mechanism for the dysfunction of he humoral immune response against HIV. Virology 2010; 397(1):7-13).
Zellseparation aus Deutschland 
