세포의 농축과 세포 분리 방법의 최적화는 많은 연구자들에게 중요한 역할을 합니다. 다양한 세포 유형을 분류하기 위한 다양한 접근법이 존재하며, 적절한 방법의 선택은 종종 세포 유형 또는 세포 하위 집합에 따라 달라집니다. 세포를 분리하는 가장 빠르고 비용 효율적인 방법 중 하나는 밀도 구배 원심분리입니다. 개별 혈액 성분의 밀도가 서로 다르기 때문에 적절한 밀도 구배 배지를 사용하여 한 단계 원심분리로 분리할 수 있습니다. 이 기술은 원심분리 시 밀도가 다른 입자의 침강 속도가 다르다는 사실에 기반합니다. 적혈구와 같은 무거운 입자는 빠르게 침전되는 반면 혈소판과 같은 가벼운 세포는 더 천천히 침전됩니다. 다음 그림은 혈액에서 가장 중요한 세포 집단의 분포를 보여줍니다. 적혈구의 밀도가 가장 높고 혈소판의 밀도가 가장 낮습니다.
그림: 혈액은 주로 다음과 같은 세포 집단으로 구성됩니다: 혈소판(1), 단핵구(2), 림프구(3), 호염기구 과립구(4), 호중구 과립구(5), 호산구 과립구(6) 및 적혈구(7). 세포 집단은 밀도와 세포 수가 다릅니다. 세포 집단의 밀도가 다르면 밀도 배지를 사용하여 농축에 사용할 수 있습니다.
표: 혈액 세포의 밀도 범위
Typ | 혈액 세포 | 밀도(g/ml) |
1 | 혈소판 | 1,050 - 1,070 |
2 | 단핵구 | 1,060 - 1,068 |
3 | 림프구 | 1,067 - 1,077 |
4 | 호염기성 과립구 | 1,072 - 1,081 |
5 | 호중구 과립구 | 1,079 - 1,098 |
6 | 호산구 과립구 | 1,089 - 1,095 |
7 | 적혈구 | 1,090 - > 1,100 |
그림에서 볼 수 있듯이 세포 또는 세포 집단의 밀도는 평균값을 중심으로 분포합니다. 또한 서로 다른 세포 집단의 밀도가 겹칩니다. 평균값 주변의 분포뿐만 아니라 범위도 고정된 값이 아닙니다. 밀도의 변동은 다양한 요인에 의해 영향을 받을 수 있습니다. 세포의 밀도에 영향을 미치는 가장 중요한 요인 중 하나는 수분 공급입니다.
각 밀도 매체에는 정의된 컷오프가 있습니다. 컷오프보다 밀도가 낮은 모든 세포는 분리 배지에 한 층으로 모입니다. 컷오프보다 밀도가 높은 세포는 분리 배지를 통과하여 튜브 바닥에 모입니다.