PBMC - 末梢血単核細胞

PBMC - 末梢血単核細胞

末梢血単核球(PBMC)とは、単一の丸い核を持つ血液細胞のこと。末梢」とは、骨髄などの造血器官には存在せず、末梢血液中を循環している成熟した血液細胞のことです。末梢血の主な成分には、輸送媒体となる血漿、赤血球(赤血球)、白血球(白血球)と血小板(血栓)。

PMNC(末梢単核球)またはMNC(単核球)と呼ばれることもあるPBMCは、すべての単核白血球で構成されています。これらには

- リンパ球(T細胞、B細胞、NK細胞)

- 単球

- 樹状細胞と 

- 好塩基性顆粒球。

密度勾配遠心分離によるPBMCの単離/濃縮

PBMC(末梢血単核球)という用語は、以下の細胞からの分離と密接に関連しています。 全血 を通して 密度勾配遠心分離.

顆粒球のような多形核白血球(複数の分節した核を持つ)は、この画分では減少します。好中球および好酸球顆粒球は、標準的な密度勾配分離で調製したPBMC画分から濃縮することはできません(培地の密度は1.077g/ml)。好塩基性顆粒球は密度が異なり、PBMC分画に部分的に認められます。赤血球は最初の細胞数に比べて強く減少しています。

密度勾配で濃縮されたPBMCはバフィーコートと呼ばれることもあります。ここでいうバフィーコートとは、間相に濃縮された白血球の層のことです。

まず、決められた濃度の合成ポリマー溶液を血液またはサンプル物質と重ね合わせます。調製後、遠心分離を行います。2つの溶液の間の相に、細胞が対応する密度で蓄積します。PBMCを含む間相は注意深く除去されます。濃縮された単核球は洗浄され、さらなる用途に使用されます。


PBMCスピン培地によるPBMCの分離/濃縮

全血 を注意深く重ねます。 PBMCスピン培地 (2)を遠沈管に入れます。2つの液体が混ざらないように注意してください。プルリメートチューブを使用することもできます。pluriMateバリアーを使用すると、重層が容易になり、サンプル物質が密度媒体と混合するのを防ぐことができます。  


PBMCスピン培地を用いたPBMCの調製。試料(1)を密度培地(2)の上に注意深く置きます。

図1: PBMCの調製 PBMCスピン培地.試料(1)を密度媒体(2)に慎重に重ねます。 


次の遠心分離ステップでは、実際の 密度勾配遠心分離サンプルは異なる層に分離されます。単核細胞(2)は血漿(1)と密度培地(3)の間に濃縮されます。


密度勾配遠心後の層の分布。PBMC(2)は密度勾配培地に濃縮されます(3)。赤血球、顆粒球、死細胞は培地を通過し、チューブの底に位置します(4)。
図2: レイヤーの分布 密度勾配遠心分離.PBMC(2)は密度培地(3)上で濃縮されます。 赤血球, グラヌロセン と死細胞は培地を通過し、チューブの底に見られます(4)。