PBMC - 外周血单核细胞

PBMC - 外周血单核细胞

外周血单核细胞(PBMC)是一种具有单个圆形细胞核的血细胞。所谓 "外周血",是指不在骨髓等造血器官中,而是在外周血中循环的成熟血细胞。外周血的主要成分包括血浆(作为运输介质)和红细胞(如血小板)。红细胞白细胞白细胞) 和 血小板(血栓滕)。

PBMC 有时也称为 PMNC(外周单核细胞)或 MNC(单核细胞),由所有单核白细胞组成。这些细胞包括

- 淋巴细胞(T 细胞、B 细胞、NK 细胞)

- 单核细胞

- 树突状细胞和 

- 嗜碱性粒细胞

用密度梯度离心法分离/富集白细胞母细胞

PBMC(外周血单核细胞)一词与从以下细胞中分离细胞密切相关 全血 通过 密度梯度离心.

粒细胞等多形核白细胞(具有多个分节核)在此部分中被耗尽。中性粒细胞和嗜酸性粒细胞无法从标准密度梯度分离法制备的 PBMC 部分中富集(培养基密度为 1.077 g/ml)。嗜碱性粒细胞的密度不同,可在 PBMC 部分中发现部分嗜碱性粒细胞。与初始细胞数相比,红细胞明显减少。

密度梯度富集的 PBMC 有时被称为 "缓冲衣"。在这里,"缓冲衣 "指的是间期富集的白细胞层。

首先,在血液或样本材料上覆盖一定密度的合成聚合物溶液。制备完成后,进行离心步骤。在两种溶液的中间相中,细胞以相应的密度聚集。含有 PBMC 的间相会被小心移除。然后对富集的单核细胞进行洗涤并用于进一步的应用。


用 PBMC 旋转培养基分离/富集 PBMC

这个 全血 小心翼翼地叠加到 PBMC 旋转培养基 (2) ,将其放入离心管中。必须注意确保两种液体不会混合。也可以使用 pluriMate 管。pluriMate 隔离层便于分层,防止样品材料与密度介质混合。  


使用 PBMC 旋转培养基制备 PBMC。将样本材料(1)小心地放在密度介质(2)上。

图 1: 制备 PBMC 时使用 PBMC 旋转培养基.将样品材料 (1) 小心地覆盖在密度介质 (2) 上。 


在接下来的离心步骤中,实际的 密度梯度离心将样本分离到不同的层中。单核细胞(2)在血浆(1)和密度介质(3)之间富集。


密度梯度离心后各层的分布。白细胞母细胞(2)富集在密度培养基(3)上。红细胞、粒细胞和死细胞穿过培养基,位于离心管底部(4)。
图 2: 各层的分布情况,根据 密度梯度离心.在密度培养基(3)上富集 PBMC(2)。 红细胞, Granulosene 死细胞则穿过培养基,出现在试管底部 (4)。