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PBMC - 外周血单核细胞

在研究中可靠分离和处理 PBMCs 的技巧和窍门

PBMC - 外周血单核细胞

外周血单核细胞(PBMC)是一种具有单个圆形细胞核的血细胞。外周 "一词指的是不位于骨髓等造血器官,而是在外周血中循环的成熟血细胞。 

注:外周血是指在骨髓中形成后进入血管并在血管中循环的血液。我们的文章:"作为细胞分离起始材料的全血"一文中包含更多有关血液的有趣信息。 

除了作为运输介质的血浆外,外周血的主要成分还包括红细胞。 血细胞(红细胞), 白细胞 ) 和 血小板(血栓滕)。

PBMC 有时也称为 PMNC(外周单核细胞)或 MNC(单核细胞),由所有单核白细胞组成。这些细胞包括

- 淋巴细胞(T 细胞、B 细胞、NK 细胞)

- 单核细胞

- 树突状细胞和 

- 嗜碱性粒细胞

用密度梯度离心法分离/富集白细胞母细胞

PBMC(外周血单核细胞)一词与从以下细胞中分离细胞密切相关 全血 通过 密度梯度离心由于血液成分的密度不同,因此可以将其分离;分离方法是在适当的密度梯度培养基中进行一步离心。单核细胞的临界值为 1.077 g/ml。

密度梯度富集的PBMC有时被称为血细胞层。在此情况下,血细胞层是指间期富集的白细胞层。在这个特殊情况下,血细胞层仅由单核细胞组成,因此是一种特殊的血细胞层。

粒细胞等多形核白细胞(具有多个分节核)在此部分中被耗尽。中性粒细胞和嗜酸性粒细胞无法从标准密度梯度分离法制备的 PBMC 部分中富集(培养基密度为 1.077 g/ml)。嗜碱性粒细胞的密度不同,可在 PBMC 部分中发现部分嗜碱性粒细胞。与初始细胞数相比,红细胞明显减少。

首先,在血液或样本材料上覆盖一定密度的合成聚合物溶液。制备完成后,进行离心步骤。在两种溶液的中间相中,细胞以相应的密度聚集。含有 PBMC 的间相会被小心移除。然后对富集的单核细胞进行洗涤并用于进一步的应用。

使用密度梯度培养基富集 PBMC 的一般过程

首先,在血液或样本材料上覆盖一定密度的合成聚合物溶液。制备完成后,进行离心步骤。细胞以相应的密度聚集在两种溶液的相间层中。含有 PBMC 的相间层被小心移除。然后对富集的单核细胞进行洗涤并用于进一步的应用。

用 PBMC 旋转培养基分离/富集 PBMC

这个 全血 小心翼翼地叠加到 PBMC 旋转培养基 (2), welches in einem Zentrifugenröhrchen vorgelegt wird, gegeben. Dabei ist darauf zu achten, dass sich die beiden Flüssigkeiten nicht miteinander vermischen. Alternativ können pluriMate Röhrchen verwendet werden. Alternativ können pluriMate Röhrchen verwendet werden. Die pluriMate Barriere erleichtert das  Überschichten und verhindert die Vermischung von Probenmaterial mit dem Dichtemedium.  


使用 PBMC 旋转培养基制备 PBMC。将样本材料(1)小心地放在密度介质(2)上。

Abb. 1: PBMC Vorbereitung mit PBMC 旋转培养基.将样品材料 (1) 小心地覆盖在密度介质 (2) 上。 


在接下来的离心步骤中,实际的 密度梯度离心将样本分离到不同的层中。单核细胞(2)在血浆(1)和密度介质(3)之间富集。


密度梯度离心后各层的分布。白细胞母细胞(2)富集在密度培养基(3)上。红细胞、粒细胞和死细胞穿过培养基,位于离心管底部(4)。
图 2: 各层的分布情况,根据 密度梯度离心.在密度培养基(3)上富集 PBMC(2)。 红细胞, Granulosene 死细胞则穿过培养基,出现在试管底部 (4)。