PBMC - Célula mononuclear de sangre periférica
Una célula mononuclear de sangre periférica (PBMC) es una célula sanguínea con un solo núcleo redondo. El término "periférica" se refiere a las células sanguíneas maduras que no se encuentran en órganos hematopoyéticos como la médula ósea, sino que circulan en la sangre periférica. Los principales componentes de la sangre periférica incluyen el plasma sanguíneo, que sirve como medio de transporte, así como los glóbulos rojos (eritrocitos), glóbulos blancos (Leucocitos) y Plaquetas (trombocitos).
Las PBMC, a veces denominadas PMNC (células mononucleares periféricas) o MNC (células mononucleares), comprenden todos los leucocitos mononucleares. Entre ellos se incluyen:
- Linfocitos (células T, células B, células NK)
- Monocitos
- Células dendríticas y
- Granulocitos basófilos.
Aislamiento/enriquecimiento de PBMC mediante centrifugación en gradiente de densidad
El término PBMC (células mononucleares de sangre periférica) está estrechamente asociado con el aislamiento de células de sangre entera a través de una Centrifugación en gradiente de densidad.
Los leucocitos polimorfonucleares (con núcleos multisegmentados), como los granulocitos, se encuentran deplecionados en esta fracción. Los granulocitos neutrófilos y eosinófilos no pueden enriquecerse a partir de una fracción de PBMC preparada mediante separación por gradiente de densidad estándar (el medio tiene una densidad de 1,077 g/ml). Los granulocitos basófilos difieren en densidad y pueden encontrarse parcialmente en la fracción de PBMC. El recuento de eritrocitos se reduce considerablemente en comparación con el recuento celular inicial.
Las PBMC enriquecidas por gradiente de densidad a veces se denominan capa leucocítica. En este contexto, la capa leucocítica describe la capa de leucocitos enriquecidos en la interfase.
Primero, se recubre una solución de polímero sintético con una densidad definida con sangre o muestra. Tras la preparación, se realiza una centrifugación. En la interfase entre las dos soluciones, las células se acumulan a la densidad correspondiente. La interfase que contiene las PBMC se retira cuidadosamente. Las células mononucleares enriquecidas se lavan y se utilizan para su posterior aplicación.
Aislamiento/enriquecimiento de PBMC con medio de centrifugación de PBMC
El sangre entera se superpone cuidadosamente a la Medio de centrifugación PBMC (2), que se coloca en un tubo de centrífuga. Se debe tener cuidado para evitar que los dos líquidos se mezclen. Como alternativa, se pueden utilizar tubos pluriMate. La barrera pluriMate facilita la estratificación y evita que la muestra se mezcle con el medio de densidad.
Fig. 1: Preparación de PBMC con Medio de centrifugación PBMCEl material de muestra (1) se superpone cuidadosamente sobre el medio de densidad (2).
En el siguiente paso de centrifugación, el real centrifugación en gradiente de densidadLa muestra se separa en diferentes capas. Las células mononucleares (2) se enriquecen entre el plasma (1) y el medio de densidad (3).
