Berigelse af celler og optimering af celleseparationsmetoder spiller en afgørende rolle for mange forskere. Der er forskellige tilgange til sortering af forskellige celletyper, og valget af den rette metode afhænger ofte af celletypen eller celleundergruppen. En af de hurtigere og mere omkostningseffektive metoder til at adskille celler er tæthedsgradientcentrifugering. Baseret på de forskellige tætheder af de enkelte blodkomponenter kan disse adskilles ved centrifugering i et enkelt trin med det passende tæthedsgradientmedium. Teknikken er baseret på det faktum, at partikler med forskellige densiteter har forskellige sedimentationshastigheder under centrifugering. Tunge partikler som f.eks. erytrocytter sedimenterer hurtigt, mens lettere celler som f.eks. trombocytter sedimenterer langsommere. Den følgende figur viser fordelingen af de vigtigste cellepopulationer i blodet. Erythrocytterne har den højeste tæthed og trombocytterne den laveste.
Figur: Blod består hovedsageligt af følgende cellepopulationer: Trombocytter (1), monocytter (2), lymfocytter (3), basofile granulocytter (4), neutrofile granulocytter (5), eosinofile granulocytter (6) og erythrocytter (7). Cellepopulationerne adskiller sig i deres tæthed og celleantal. De forskellige tætheder af cellepopulationerne kan bruges til berigelse med tæthedsmedier.
Tabel: Tæthedsintervaller for blodceller
Type | Blodcelle | Tæthed (g/ml) |
1 | Trombocytter | 1,050 - 1,070 |
2 | Monocytter | 1,060 - 1,068 |
3 | Lymfocytter | 1,067 - 1,077 |
4 | Basofile granulocytter | 1,072 - 1,081 |
5 | Neutrofil granulocyt | 1,079 - 1,098 |
6 | Eosinofile granulocytter | 1,089 - 1,095 |
7 | Erytrocytter | 1.090 - > 1.100 |
Som du kan se på figuren, er tætheden af cellerne eller cellepopulationerne en fordeling omkring en middelværdi. Desuden overlapper tæthederne af de forskellige cellepopulationer hinanden. Både området og fordelingen omkring middelværdien er ikke faste værdier. Udsving i tætheden kan påvirkes af forskellige faktorer. En af de vigtigste faktorer, der påvirker celletætheden, er hydrering.
Det respektive densitetsmedie har en defineret cut-off. Alle celler med en lavere densitet end cut-off samles som et lag på separationsmediet. Celler med en højere tæthed end cut-off passerer gennem separationsmediet og samles i bunden af røret.