PBMC - Cellule mononucléaire du sang périphérique
Une cellule mononucléaire du sang périphérique (PBMC) est une cellule sanguine dotée d'un seul noyau rond. Le terme "périphérique" fait référence aux cellules sanguines matures qui ne sont pas situées dans les organes hématopoïétiques tels que la moelle osseuse, mais qui circulent dans le sang périphérique. Les principaux composants du sang périphérique comprennent le plasma sanguin, qui sert de milieu de transport, ainsi que les globules rouges (Erythrocytes), les globules blancs (Leucocytes) et Blutplättchen (Thrombozyten).
Les PBMC, parfois appelées PMNC (peripheral mononuclear cells) ou MNC (mononuclear cells), comprennent tous les leucocytes mononucléaires. Il s'agit notamment de:
- Lymphocytes (cellules T, cellules B, cellules NK)
- Monocytes
- Cellules dendritiques et
- Granulocytes basophiles.
Isolement / enrichissement des PBMC par centrifugation en gradient de densité
Le terme PBMC (peripheral blood mononuclear cells) est étroitement associé à l'isolement des cellules du sang périphérique sang total par le biais d'un Centrifugation en gradient de densité.
Les leucocytes polymorphonucléaires (à noyaux multiples et segmentés), tels que les granulocytes, sont appauvris dans cette fraction. Les granulocytes neutrophiles et éosinophiles ne peuvent pas être enrichis à partir d'une fraction PBMC préparée par séparation standard en gradient de densité (le milieu a une densité de 1,077 g/ml). Les granulocytes basophiles ont une densité différente et peuvent être partiellement retrouvés dans la fraction PBMC. Les érythrocytes sont fortement réduits par rapport au nombre initial de cellules.
Les PBMC enrichis par le gradient de densité sont parfois appelés couche leucocytaire. Dans ce contexte, le buffy coat décrit la couche de leucocytes enrichis dans l'interphase.
Tout d'abord, une solution de polymère synthétique d'une densité définie est recouverte de sang ou d'un échantillon. Après la préparation, une étape de centrifugation a lieu. Dans l'interphase entre les deux solutions, les cellules s'accumulent à la densité correspondante. L'interphase contenant les PBMC est soigneusement éliminée. Les cellules mononucléaires enrichies sont ensuite lavées et utilisées pour d'autres applications.
Isolement / enrichissement des PBMC avec le milieu de centrifugation des PBMC
Le sang total est soigneusement superposée à la milieu de culture PBMC (2), qui est placé dans un tube à centrifuger. Il faut veiller à ce que les deux liquides ne se mélangent pas. Il est également possible d'utiliser des tubes pluriMate. La barrière pluriMate facilite la stratification et empêche le matériau de l'échantillon de se mélanger avec le milieu de densité.
Fig. 1 : Préparation de PBMC avec milieu de culture PBMC. L'échantillon (1) est soigneusement superposé sur le support de densité (2).
Lors de l'étape de centrifugation suivante, le taux réel de centrifugation en gradient de densitél'échantillon est séparé en différentes couches. Les cellules mononucléaires (2) sont enrichies entre le plasma (1) et le milieu de densité (3).
