PBMC - Mononukleære celler i perifert blod
En mononukleær celle i perifert blod (PBMC) er en blodcelle med en enkelt, rund kerne. Udtrykket "perifert" henviser til modne blodceller, der ikke befinder sig i hæmatopoietiske organer som f.eks. knoglemarven, men cirkulerer i det perifere blod. Hovedbestanddelene i det perifere blod er blodplasmaet, der fungerer som transportmedium, og de røde blodlegemer (Erytrocytter), hvide blodlegemer (Leukocytter) og blodplader (trombocytter).
PBMC'er, også kaldet PMNC'er (perifere mononukleære celler) eller MNC'er (mononukleære celler), omfatter alle mononukleære leukocytter. Disse omfatter:
- Lymfocytter (T-celler, B-celler, NK-celler)
- Monocytter
- Dendritiske celler og
- Basofile granulocytter.
Isolering/berigelse af PBMC ved tæthedsgradientcentrifugering
Udtrykket PBMC (perifere mononukleære blodceller) er tæt forbundet med isolering af celler fra fuldblods gennem en Tæthedsgradient-centrifugering.
Polymorfonukleære leukocytter (med flere segmenterede kerner), såsom granulocytter, er udtømt i denne fraktion. Neutrofile og eosinofile granulocytter kan ikke beriges fra en PBMC-fraktion, der er fremstillet ved standard densitetsgradientseparation (mediet har en densitet på 1,077 g/ml). Basofile granulocytter har en anden densitet og kan delvist findes i PBMC-fraktionen. Erythrocytterne er stærkt reduceret i forhold til det oprindelige celletal.
PBMC'er, der er beriget med tæthedsgradienter, kaldes undertiden også buffy coat. I denne sammenhæng beskriver buffy coat laget af berigede leukocytter i interfasen.
Først overlejres en syntetisk polymeropløsning med en specifik tæthed med blod eller prøvemateriale. Efter forberedelsen finder et centrifugeringstrin sted. Cellerne med den tilsvarende tæthed ophobes i interfasen mellem de to opløsninger. Interfasen, der indeholder PBMC'erne, fjernes omhyggeligt. De berigede mononukleære celler vaskes derefter og bruges til yderligere anvendelse.
Isolering/berigelse af PBMC med PBMC Spin Medium
Den fuldblods vil blive omhyggeligt pBMC-spinmedium (2), som anbringes i et centrifugerør. Sørg for, at de to væsker ikke blandes. Alternativt kan der anvendes pluriMate-rør. PluriMate-barrieren letter stratificeringen og forhindrer, at prøvematerialet blandes med densitetsmediet.
Fig. 1: PBMC-præparat med pBMC-spinmedium. Prøvematerialet (1) placeres forsigtigt på densitetsmediet (2).
I det følgende centrifugeringstrin bliver den faktiske tæthedsgradient-centrifugeringprøven opdeles i de forskellige lag. De mononukleære celler (2) beriges mellem plasmaet (1) og densitetsmediet (3).
