PBMC - Mononukleære celler i perifert blod
En mononukleær celle i perifert blod (PBMC) er en blodcelle med en enkelt, rund kerne. Udtrykket "perifert" henviser til modne blodceller, der ikke befinder sig i hæmatopoietiske organer som f.eks. knoglemarven, men cirkulerer i det perifere blod. Hovedbestanddelene i det perifere blod er blodplasmaet, der fungerer som transportmedium, og de røde blodlegemer ( Blutkörperchen (Erythrozyten), weiße Blutkörperchen (Leukozyten) ) og blodplader (trombocytter).
PBMC'er, også kaldet PMNC'er (perifere mononukleære celler) eller MNC'er (mononukleære celler), omfatter alle mononukleære leukocytter. Disse omfatter:
- Lymfocytter (T-celler, B-celler, NK-celler)
- Monocytter
- Dendritiske celler og
- Basofile granulocytter.
Isolering/berigelse af PBMC ved tæthedsgradientcentrifugering
Udtrykket PBMC (perifere mononukleære blodceller) er tæt forbundet med isolering af celler fra fuldblods gennem en Tæthedsgradient-centrifugering.
Polymorfonukleære leukocytter (med flere segmenterede kerner), såsom granulocytter, er udtømt i denne fraktion. Neutrofile og eosinofile granulocytter kan ikke beriges fra en PBMC-fraktion, der er fremstillet ved standard densitetsgradientseparation (mediet har en densitet på 1,077 g/ml). Basofile granulocytter har en anden densitet og kan delvist findes i PBMC-fraktionen. Erythrocytterne er stærkt reduceret i forhold til det oprindelige celletal.
PBMC'er, der er beriget med tæthedsgradienter, kaldes undertiden også buffy coat. I denne sammenhæng beskriver buffy coat laget af berigede leukocytter i interfasen.
Først overlejres en syntetisk polymeropløsning med en specifik tæthed med blod eller prøvemateriale. Efter forberedelsen finder et centrifugeringstrin sted. Cellerne med den tilsvarende tæthed ophobes i interfasen mellem de to opløsninger. Interfasen, der indeholder PBMC'erne, fjernes omhyggeligt. De berigede mononukleære celler vaskes derefter og bruges til yderligere anvendelse.
Isolering/berigelse af PBMC med PBMC Spin Medium
Den fuldblods vil blive omhyggeligt pBMC-spinmedium (2), som anbringes i et centrifugerør. Sørg for, at de to væsker ikke blandes. Alternativt kan der anvendes pluriMate-rør. PluriMate-barrieren letter stratificeringen og forhindrer, at prøvematerialet blandes med densitetsmediet.
Fig. 1: PBMC-præparat med pBMC-spinmedium. Prøvematerialet (1) placeres forsigtigt på densitetsmediet (2).
I det følgende centrifugeringstrin bliver den faktiske tæthedsgradient-centrifugeringprøven opdeles i de forskellige lag. De mononukleære celler (2) beriges mellem plasmaet (1) og densitetsmediet (3).
