밀도 구배 원심분리

혈액에서 세포 분리

세포 농축과 세포 분리 방법의 최적화는 많은 연구자들에게 결정적인 역할을 합니다. 다양한 세포 유형을 분류하기 위한 다양한 접근법이 존재하며, 세포 유형 또는 세포 하위 집합에 따라 적절한 방법을 선택하는 경우가 많습니다. 세포를 분리하는 가장 빠르고 비용 효율적인 방법 중 하나는 밀도 구배 원심분리입니다."세포 분리 및 세포 분리 방법" 문서에서 혈액과 같은 이질적인 혼합물에서 세포를 농축하기 위한 다양한 옵션을 요약했습니다.

세포 분리를 위한 세포 밀도 지원

개별 혈액 성분의 밀도가 다르므로 적절한 밀도 구배 배지를 사용하여 단일 단계 원심분리로 분리할 수 있습니다. 이 기술은 밀도가 다른 입자는 원심분리 중에 침전 속도가 다르다는 사실에 기반합니다. 적혈구와 같은 무거운 입자는 빠르게 침전되는 반면 혈소판과 같은 가벼운 세포는 더 천천히 침전됩니다. 다음 그림은 혈액에서 가장 중요한 세포 집단의 분포를 보여줍니다. 적혈구의 밀도가 가장 높고 혈소판의 밀도가 가장 낮습니다.

밀도의 함수로서의 혈액 세포 분포

다음 그림(그림 1)은 밀도에 따른 혈액 세포의 분포를 보여줍니다. 혈소판 (1)의 밀도가 가장 낮고 적혈구 (2)의 밀도가 가장 높습니다. 인구당 세포 수 또한 표시됩니다. 적혈구가 가장 큰 개체군, 혈소판이 두 번째로 큰 개체군을 나타냅니다.

혈액은 주로 다음과 같은 세포군에서 발생합니다: 혈소판 (1), 단핵구 (2), 림프구 (3), 호염기구 (4), 호중구 과립구 (5), 호산구 과립구 (6) 및 적혈구 (7). 세포 집단은 크기와 세포 수로 구분됩니다. 세포군의 서로 다른 특성은 디테메디의 도움을 받아 보안에 사용할 수 있습니다.

그림 1: 밀도의 함수에 따른 혈액의 세포 집단 그림

혈소판(1), 단핵구(2), 림프구(3), 호염기구 과립구(4), 호중구 과립구(5), 호산구 과립구(6) 및 적혈구(7)의 세포 집단은 밀도와 세포 수가 다릅니다. 세포 집단의 서로 다른 밀도는 밀도 구배 배지를 사용하여 농축하는 데 사용됩니다.

표: 혈액 세포의 밀도 범위

Typ	혈액 세포	밀도(g/ml)
1	혈소판	1,050 - 1,070
2	단핵구	1,060 - 1,068
3	림프구	1,067 - 1,077
4	호염기성 과립구	1,072 - 1,081
5	호중구 과립구	1,079 - 1,098
6	호산구 과립구	1,089 - 1,095
7	적혈구	1,090 - > 1,100

Typ	혈액 세포	밀도(g/ml)
1	혈소판	1,050 - 1,070
2	단핵구	1,060 - 1,068
3	림프구	1,067 - 1,077
4	호염기성 과립구	1,072 - 1,081
5	호중구 과립구	1,079 - 1,098
6	호산구 과립구	1,089 - 1,095
7	적혈구	1,090 - > 1,100

그림과 표에서 볼 수 있듯이 세포 또는 세포 집단의 밀도는 평균값을 중심으로 분포합니다. 또한 서로 다른 세포 집단의 밀도가 겹칩니다. 평균값 주변의 분포뿐만 아니라 범위도 고정된 값이 아닙니다. 밀도의 변동은 다양한 요인에 의해 영향을 받을 수 있습니다. 세포의 밀도에 영향을 미치는 가장 중요한 요인 중 하나는 세포의 수분 공급입니다. 전혈 세포의 밀도에 영향을 미치는 또 다른 중요한 요소는 기증자 유기체 외부의 시간입니다.

밀도 구배 원심분리를 위한 밀도 구배 매체 사용

혈액 세포의 밀도에 대한 지식이 있으면 다양한 세포 집단을 특별히 농축할 수 있습니다. 이를 위해 밀도 구배 배지(밀도가 정의된 용액)가 사용됩니다. 이 밀도에 따라 분리 한계(컷오프)가 결정됩니다. 컷오프보다 밀도가 낮은 세포는 배지 위에 한 층으로 모이고 밀도가 높은 세포는 분리 배지를 통과하여 튜브 바닥에 가라앉습니다. 다음 그림은말초 혈액 단핵 세포 농축을 위한 분리 배지를 사용하여 전혈을 분리하는 일반적인 이미지(줄여서 PBMC)를 보여줍니다.

PBMC 분리, 50ml 튜브에서 밀도 구배 원심분리 후 층 배열