PBMC - 外周血单核细胞
外周血单核细胞(PBMC)是一种具有单个圆形细胞核的血细胞。外周 "一词指的是不位于骨髓等造血器官,而是在外周血中循环的成熟血细胞。
注:外周血是指在骨髓中形成后进入血管并在血管中循环的血液。我们的文章:"作为细胞分离起始材料的全血"。一文中包含更多有关血液的有趣信息。
外周血的主要成分包括血浆(作为运输介质)、红细胞、血红蛋白和血红蛋白钙。 血细胞(红细胞), 白细胞 和血小板(血小板)。
PBMC 有时也称为 PMNC(外周单核细胞)或 MNC(单核细胞),由所有单核白细胞组成。这些细胞包括
- 淋巴细胞(T 细胞、B 细胞、NK 细胞)
- 单核细胞
- 树突状细胞和
- 嗜碱性粒细胞
用密度梯度离心法富集 PBMC
PBMC(外周血单核细胞)一词与以下细胞的积累密切相关 全血 通过 密度梯度离心由于血液成分的密度不同,可以通过在适当的密度梯度培养基中进行一步离心分离。单核细胞的临界值为 1.077 克/毫升。
密度梯度富集的 PBMC 有时被称为缓冲衣。在这里,"水包膜 "指的是处于间期的富集白细胞层。对于 PBMC 这种特殊情况,水包被只由单核细胞组成,因此是一种特殊的水包被。
粒细胞等多形核白细胞(具有多个分节核)在 PBMC 中消耗殆尽。因此,中性粒细胞和嗜酸性粒细胞无法从标准密度梯度分离法制备的 PBMC 部分中富集(培养基密度为 1.077 g/ml)。嗜碱性粒细胞的密度不同,可在 PBMC 部分中发现部分嗜碱性粒细胞。与初始细胞数相比,红细胞明显减少。
使用密度梯度培养基富集 PBMC 的一般过程
首先,在血液或样本材料上覆盖一定密度的合成聚合物溶液。制备完成后,进行离心步骤。细胞以相应的密度聚集在两种溶液的相间层中。含有 PBMC 的相间层被小心移除。然后对富集的单核细胞进行洗涤并用于进一步的应用。
用 PBMC 旋转培养基分离或富集 PBMC
达斯 全血 (1) 首先要仔细应用于 PBMC 旋转培养基 (2) ,将其放入离心管中。必须注意确保两种液体不会混合。也可以使用 pluriMate 管。pluriMate 隔离层便于分层,防止样品材料与密度梯度培养基混合。
图 1: 制备 PBMC 时使用 PBMC 旋转培养基.将样品材料 (1) 小心地放在密度介质 (2) 上。