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PBMC - 外周血单核细胞

在研究中可靠分离和处理 PBMCs 的技巧和窍门

PBMC - 外周血单核细胞

外周血单核细胞(PBMC)是一种具有单个圆形细胞核的血细胞。外周 "一词指的是不位于骨髓等造血器官,而是在外周血中循环的成熟血细胞。 

注:外周血是指在骨髓中形成后进入血管并在血管中循环的血液。我们的文章:"作为细胞分离起始材料的全血"一文中包含更多有关血液的有趣信息。 

外周血的主要成分包括血浆(作为运输介质)、红细胞、血红蛋白和血红蛋白钙。 血细胞(红细胞), 白细胞血小板(血小板)

PBMC 有时也称为 PMNC(外周单核细胞)或 MNC(单核细胞),由所有单核白细胞组成。这些细胞包括

- 淋巴细胞(T 细胞、B 细胞、NK 细胞)

- 单核细胞

- 树突状细胞和 

- 嗜碱性粒细胞

用密度梯度离心法富集 PBMC

PBMC(外周血单核细胞)一词与以下细胞的积累密切相关 全血 通过 密度梯度离心由于血液成分的密度不同,可以通过在适当的密度梯度培养基中进行一步离心分离。单核细胞的临界值为 1.077 克/毫升。

密度梯度富集的 PBMC 有时被称为缓冲衣。在这里,"水包膜 "指的是处于间期的富集白细胞层。对于 PBMC 这种特殊情况,水包被只由单核细胞组成,因此是一种特殊的水包被。

粒细胞等多形核白细胞(具有多个分节核)在 PBMC 中消耗殆尽。因此,中性粒细胞和嗜酸性粒细胞无法从标准密度梯度分离法制备的 PBMC 部分中富集(培养基密度为 1.077 g/ml)。嗜碱性粒细胞的密度不同,可在 PBMC 部分中发现部分嗜碱性粒细胞。与初始细胞数相比,红细胞明显减少。

使用密度梯度培养基富集 PBMC 的一般过程

首先,在血液或样本材料上覆盖一定密度的合成聚合物溶液。制备完成后,进行离心步骤。细胞以相应的密度聚集在两种溶液的相间层中。含有 PBMC 的相间层被小心移除。然后对富集的单核细胞进行洗涤并用于进一步的应用。

用 PBMC 旋转培养基分离或富集 PBMC

达斯 全血 (1) 首先要仔细应用于 PBMC 旋转培养基 (2) ,将其放入离心管中。必须注意确保两种液体不会混合。也可以使用 pluriMate 管。pluriMate 隔离层便于分层,防止样品材料与密度梯度培养基混合。  

使用 PBMC 旋转培养基制备 PBMC。将样本材料(1)小心地放在密度介质(2)上。

 图 1: 制备 PBMC 时使用 PBMC 旋转培养基.将样品材料 (1) 小心地放在密度介质 (2) 上。


 在接下来的离心步骤中,实际的 密度梯度离心将样本分离到不同的层中。单核细胞(2)在血浆(1)和密度介质(3)之间富集。

密度梯度离心后各层的分布。白细胞母细胞(2)富集在密度培养基(3)上。红细胞、粒细胞和死细胞穿过培养基,位于离心管底部(4)。
图 2: 各层的分布情况,根据 密度梯度离心.在密度培养基(3)上富集 PBMC(2)。 红细胞, 粒细胞 死细胞穿过培养基,位于试管底部 (4)。