PBMC - Mononukleære celler i perifert blod
En mononukleær celle i perifert blod (PBMC) er en blodcelle med en enkelt, rund kerne. Udtrykket "perifer" henviser til modne blodceller, der ikke befinder sig i hæmatopoietiske organer som f.eks. knoglemarven, men som cirkulerer i det perifere blod.
BEMÆRK: Perifert blod er det blod, der kommer ind i blodkarrene efter dannelsen i knoglemarven og cirkulerer der. I vores artikel: "Fuldblod som udgangsmateriale til celleseparation." finder du yderligere interessante oplysninger om emnet blod.
Hovedkomponenterne i perifert blod omfatter blodplasma, der fungerer som transportmedium, røde Blodceller (erythrocytter), Hvide blodlegemer (leukocytter) og blodplader (trombocytter).
PBMC'er, også kaldet PMNC'er (perifere mononukleære celler) eller MNC'er (mononukleære celler), omfatter alle mononukleære leukocytter. Disse omfatter:
- Lymfocytter (T-celler, B-celler, NK-celler)
- Monocytter
- dendritiske celler og
- basofile granulocytter.
Berigelse af PBMC ved tæthedsgradientcentrifugering
Udtrykket PBMC (perifere mononukleære blodceller) er tæt forbundet med ophobningen af celler fra Fuldblods ved hjælp af en Tæthedsgradient-centrifugeringDet er muligt at adskille blodkomponenterne, da de har forskellige densiteter; dette gøres ved centrifugering i ét trin i et passende densitetsgradientmedium. Cut-off for de mononukleære celler er 1,077 g/ml.
De tæthedsgradientberigede PBMC'er omtales nogle gange som buffy coat. I denne sammenhæng beskriver buffy coat laget af berigede leukocytter i interfasen. I dette særlige tilfælde, PBMC, består buffy coat kun af mononukleære celler og er i den forstand en særlig buffy coat.
Polymorfonukleære leukocytter (med flere segmenterede kerner), som f.eks. granulocytter, er udtømt i PBMC. Neutrofile og eosinofile granulocytter kan derfor ikke beriges fra en PBMC-fraktion, der er fremstillet ved standard densitetsgradientseparation (mediet har en densitet på 1,077 g/ml). Basofile granulocytter har en anden densitet og kan delvist findes i PBMC-fraktionen. Erythrocytter er stærkt reduceret i forhold til det oprindelige celletal.
Generel proces for PBMC-berigelse ved hjælp af et tæthedsgradientmedie
Først overlejres en syntetisk polymeropløsning med en defineret tæthed med blod eller prøvemateriale. Efter forberedelsen udføres et centrifugeringstrin. Cellerne ophobes i interfasen mellem de to opløsninger ved den tilsvarende tæthed. Interfasen, der indeholder PBMC'erne, fjernes omhyggeligt. De berigede mononukleære celler vaskes derefter og bruges til yderligere anvendelse.
Isolering eller berigelse af PBMC med PBMC Spin Medium
Das Fuldblods (1) anvendes først omhyggeligt på PBMC-spinmedium (2), som anbringes i et centrifugerør. Man skal sørge for, at de to væsker ikke blandes. Alternativt kan man bruge pluriMate-rør. PluriMate-barrieren letter lagdelingen og forhindrer, at prøvematerialet blandes med densitetsgradientmediet.
Fig. 1: PBMC-præparat med PBMC-spinmedium. Prøvematerialet (1) placeres forsigtigt på densitetsmediet (2).
I det følgende centrifugeringstrin bliver den faktiske Tæthedsgradient-centrifugeringPrøven adskilles i de forskellige lag. De mononukleære celler (2) beriges mellem plasmaet (1) og densitetsmediet (3).
