PBMC: células mononucleares de sangre periférica
Una célula mononuclear de sangre periférica (CMSP) es una célula sanguínea con un único núcleo redondo. El término "periférico" se refiere a las células sanguíneas maduras que no se localizan en órganos hematopoyéticos como la médula ósea, sino que circulan por la sangre periférica.
NOTA: La sangre periférica es la que entra en los vasos sanguíneos tras su formación en la médula ósea y circula por ellos. En nuestro artículo: "La sangre total como material de partida para la separación celular". encontrará más información interesante sobre el tema de la sangre.
Los principales componentes de la sangre periférica son el plasma sanguíneo, que sirve como medio de transporte, los hematíes Células sanguíneas (eritrocitos), Glóbulos blancos (leucocitos) y las plaquetas de la sangre (trombocitos).
Las PBMC, a veces denominadas PMNC (células mononucleares periféricas) o MNC (células mononucleares), comprenden todos los leucocitos mononucleares. Entre ellos se incluyen:
- Linfocitos (células T, células B, células NK)
- Monocitos
- células dendríticas y
- granulocitos basófilos.
Enriquecimiento de PBMC mediante centrifugación en gradiente de densidad
El término PBMC (células mononucleares de sangre periférica) está estrechamente asociado a la acumulación de células de sangre entera mediante un centrifugación en gradiente de densidad La separación de los componentes sanguíneos es posible ya que tienen densidades diferentes; esto se realiza mediante centrifugación en un solo paso en un medio de gradiente de densidad adecuado. El punto de corte para las células mononucleares es de 1,077 g/ml.
Las PBMC enriquecidas en gradiente de densidad se denominan a veces buffy coat. En este contexto, buffy coat describe la capa de leucocitos enriquecidos en la interfase. En este caso concreto, las PBMC, la capa leucocitaria está formada únicamente por células mononucleares y es, en este sentido, una capa leucocitaria especial.
Los leucocitos polimorfonucleares (con múltiples núcleos segmentados), como los granulocitos, están agotados en las PBMC. Por lo tanto, los granulocitos neutrófilos y eosinófilos no pueden enriquecerse a partir de una fracción de PBMC preparada mediante separación en gradiente de densidad estándar (el medio tiene una densidad de 1,077 g/ml). Los granulocitos basófilos difieren en densidad y pueden encontrarse parcialmente en la fracción de PBMC. Los eritrocitos están muy reducidos en comparación con el recuento celular inicial.
Proceso general de enriquecimiento de PBMC utilizando un medio de gradiente de densidad
En primer lugar, una solución de polímero sintético con una densidad definida se recubre con sangre o material de muestra. Tras la preparación, se lleva a cabo una centrifugación. Las células se acumulan en la interfase entre las dos soluciones a la densidad correspondiente. La interfase que contiene las PBMC se retira cuidadosamente. A continuación, las células mononucleares enriquecidas se lavan y se utilizan para otras aplicaciones.
Aislamiento o enriquecimiento de PBMC con PBMC Spin Medium
De sangre entera (1) se aplica primero cuidadosamente al Medio de centrifugación PBMC (2), que se coloca en un tubo de centrífuga. Hay que tener cuidado de que los dos líquidos no se mezclen. Como alternativa, pueden utilizarse tubos pluriMate. La barrera pluriMate facilita la estratificación y evita que el material de la muestra se mezcle con el medio del gradiente de densidad.
Fig. 1: Preparación de PBMC con Medio de centrifugación PBMC. El material de muestra (1) se coloca cuidadosamente sobre el medio de densidad (2).
En el siguiente paso de centrifugación, el verdadero centrifugación en gradiente de densidad la muestra se separa en las diferentes capas. Las células mononucleares (2) se enriquecen entre el plasma (1) y el medio de densidad (3).
