PBMC - Célula mononuclear de sangre periférica
Eine periphere mononukleäre Blutzelle (Peripheral Blood Mononuclear Cell, PBMC) ist eine Blutzelle mit einem einzigen, runden Kern. Der Begriff „peripher“ bezeichnet ausgereifte Blutzellen, die sich nicht in blutbildenden Organen wie dem Knochenmark befinden, sondern im peripheren Blut zirkulieren.
NOTE: Unter peripherem Blut versteht man das Blut, das nach seiner Bildung im Knochenmark in die Blutgefäße gelangt und dort im Kreislauf zirkuliert.
Zu den Hauptbestandteilen des peripheren Blutes gehören neben dem Blutplasma, das als Transportmedium dient, auch rote Blutkörperchen (Erythrozyten), weiße Blutkörperchen (Leukozyten) ) y Plaquetas (trombocitos).
Las PBMC, a veces denominadas PMNC (células mononucleares periféricas) o MNC (células mononucleares), comprenden todos los leucocitos mononucleares. Entre ellos se incluyen:
- Linfocitos (células T, células B, células NK)
- Monocitos
- Células dendríticas y
- Granulocitos basófilos.
Aislamiento/enriquecimiento de PBMC mediante centrifugación en gradiente de densidad
El término PBMC (células mononucleares de sangre periférica) está estrechamente asociado con el aislamiento de células de sangre entera a través de una Centrifugación en gradiente de densidad. Die Trennung der Blutbestandteile ist möglich, da sie verschiedene Dichten aufweisen; dies geschieht durch eine einstufige Zentrifugation in einem geeigneten Dichtegradientenmedium. Die Trenngrenze (Cut-Off) für die mononukleären Zellen liegt bei 1,077 g/ml.
Die dichtegradienten-angereicherten PBMC werden manchmal als Buffy Coat bezeichnet. In diesem Zusammenhang beschreibt Buffy Coat die Schicht der angereicherten Leukozyten in der Interphase. Für diesen speziellen Fall besteht der Buffy Coat nur aus mononukleären Zellen und ist in diesem Sinn ein spezieller Buffy Coat.
Los leucocitos polimorfonucleares (con núcleos multisegmentados), como los granulocitos, se encuentran deplecionados en esta fracción. Los granulocitos neutrófilos y eosinófilos no pueden enriquecerse a partir de una fracción de PBMC preparada mediante separación por gradiente de densidad estándar (el medio tiene una densidad de 1,077 g/ml). Los granulocitos basófilos difieren en densidad y pueden encontrarse parcialmente en la fracción de PBMC. El recuento de eritrocitos se reduce considerablemente en comparación con el recuento celular inicial.
Primero, se recubre una solución de polímero sintético con una densidad definida con sangre o muestra. Tras la preparación, se realiza una centrifugación. En la interfase entre las dos soluciones, las células se acumulan a la densidad correspondiente. La interfase que contiene las PBMC se retira cuidadosamente. Las células mononucleares enriquecidas se lavan y se utilizan para su posterior aplicación.
Allgemeiner Ablauf einer PBMC Anreicherung mit Hilfe eines Dichtegradientenmediums
Zunächst wird eine synthetische Polymerlösung, mit einer definierten Dichte, mit Blut oder Probenmaterial überlagert. Nach der Vorbereitung erfolgt ein Zentrifugationsschritt. In der Interphase zwischen den beiden Lösungen reichern sich die Zellen mit der entsprechenden Dichte an. Die Interphase, die die PBMCs enthält, wird vorsichtig entfernt. Die angereicherten mononukleären Zellen werden anschließend gewaschen und für die weitere Anwendung verwendet.
Aislamiento/enriquecimiento de PBMC con medio de centrifugación de PBMC
El sangre entera se superpone cuidadosamente a la Medio de centrifugación PBMC (2), que se coloca en un tubo de centrífuga. Se debe tener cuidado para evitar que los dos líquidos se mezclen. Como alternativa, se pueden utilizar tubos pluriMate. La barrera pluriMate facilita la estratificación y evita que la muestra se mezcle con el medio de densidad.
Fig. 1: Preparación de PBMC con Medio de centrifugación PBMCEl material de muestra (1) se superpone cuidadosamente sobre el medio de densidad (2).
En el siguiente paso de centrifugación, el real centrifugación en gradiente de densidadLa muestra se separa en diferentes capas. Las células mononucleares (2) se enriquecen entre el plasma (1) y el medio de densidad (3).
