PBMC - Cellule mononucleari del sangue periferico
Eine periphere mononukleäre Blutzelle (Peripheral Blood Mononuclear Cell, PBMC) ist eine Blutzelle mit einem einzigen, runden Kern. Der Begriff „peripher“ bezeichnet ausgereifte Blutzellen, die sich nicht in blutbildenden Organen wie dem Knochenmark befinden, sondern im peripheren Blut zirkulieren.
NOTE: Unter peripherem Blut versteht man das Blut, das nach seiner Bildung im Knochenmark in die Blutgefäße gelangt und dort im Kreislauf zirkuliert.
Zu den Hauptbestandteilen des peripheren Blutes gehören neben dem Blutplasma, das als Transportmedium dient, auch rote Blutkörperchen (Erythrozyten), weiße Blutkörperchen (Leukozyten) ) e le piastrine del sangue (trombociti).
I PBMC, talvolta chiamati PMNC (cellule mononucleari periferiche) o MNC (cellule mononucleari), comprendono tutti i leucociti mononucleati. Questi includono:
- Linfociti (linfociti T, linfociti B, linfociti NK)
- Monociti
- Cellule dendritiche e
- Granulociti basofili.
Isolamento/arricchimento di PBMC mediante centrifugazione a gradiente di densità
Il termine PBMC (cellule mononucleari del sangue periferico) è strettamente associato all'isolamento di cellule da purosangue attraverso un Centrifugazione a gradiente di densità. Die Trennung der Blutbestandteile ist möglich, da sie verschiedene Dichten aufweisen; dies geschieht durch eine einstufige Zentrifugation in einem geeigneten Dichtegradientenmedium. Die Trenngrenze (Cut-Off) für die mononukleären Zellen liegt bei 1,077 g/ml.
Die dichtegradienten-angereicherten PBMC werden manchmal als Buffy Coat bezeichnet. In diesem Zusammenhang beschreibt Buffy Coat die Schicht der angereicherten Leukozyten in der Interphase. Für diesen speziellen Fall besteht der Buffy Coat nur aus mononukleären Zellen und ist in diesem Sinn ein spezieller Buffy Coat.
I leucociti polimorfonucleati (con nuclei multipli segmentati), come i granulociti, sono impoveriti in questa frazione. I granulociti neutrofili ed eosinofili non possono essere arricchiti da una frazione di PBMC preparata mediante separazione a gradiente di densità standard (il mezzo ha una densità di 1,077 g/ml). I granulociti basofili hanno una densità diversa e possono essere parzialmente trovati nella frazione PBMC. Gli eritrociti sono molto ridotti rispetto alla conta cellulare originale.
In primo luogo, una soluzione di polimero sintetico con una densità specifica viene sovrapposta al sangue o al materiale campione. Dopo la preparazione, avviene una fase di centrifugazione. Le cellule con la densità corrispondente si accumulano nell'interfase tra le due soluzioni. L'interfase contenente le PBMC viene accuratamente rimossa. Le cellule mononucleari arricchite vengono poi lavate e utilizzate per ulteriori applicazioni.
Allgemeiner Ablauf einer PBMC Anreicherung mit Hilfe eines Dichtegradientenmediums
Zunächst wird eine synthetische Polymerlösung, mit einer definierten Dichte, mit Blut oder Probenmaterial überlagert. Nach der Vorbereitung erfolgt ein Zentrifugationsschritt. In der Interphase zwischen den beiden Lösungen reichern sich die Zellen mit der entsprechenden Dichte an. Die Interphase, die die PBMCs enthält, wird vorsichtig entfernt. Die angereicherten mononukleären Zellen werden anschließend gewaschen und für die weitere Anwendung verwendet.
Isolamento/arricchimento di PBMC con il terreno di rotazione PBMC
Il purosangue sarà attentamente terreno di rotazione PBMC (2), che viene posto in una provetta da centrifuga. Si assicuri che i due liquidi non si mescolino. In alternativa, si possono usare le provette pluriMate. La barriera pluriMate facilita la stratificazione e impedisce al materiale del campione di mescolarsi con il mezzo di densità.
Fig. 1: Preparazione dei PBMC con terreno di rotazione PBMC. Il materiale campione (1) viene posizionato con cura sul supporto di densità (2).
Nella successiva fase di centrifugazione, l'effettiva centrifugazione a gradiente di densitàil campione viene suddiviso in diversi strati. Le cellule mononucleate (2) sono arricchite tra il plasma (1) e il mezzo di densità (3).
