PBMC - Cellule mononucléaire du sang périphérique
Eine periphere mononukleäre Blutzelle (Peripheral Blood Mononuclear Cell, PBMC) ist eine Blutzelle mit einem einzigen, runden Kern. Der Begriff „peripher“ bezeichnet ausgereifte Blutzellen, die sich nicht in blutbildenden Organen wie dem Knochenmark befinden, sondern im peripheren Blut zirkulieren.
NOTE: Unter peripherem Blut versteht man das Blut, das nach seiner Bildung im Knochenmark in die Blutgefäße gelangt und dort im Kreislauf zirkuliert.
Zu den Hauptbestandteilen des peripheren Blutes gehören neben dem Blutplasma, das als Transportmedium dient, auch rote Blutkörperchen (Erythrozyten), weiße Blutkörperchen (Leukozyten) ) et Blutplättchen (Thrombozyten).
Les PBMC, parfois appelées PMNC (peripheral mononuclear cells) ou MNC (mononuclear cells), comprennent tous les leucocytes mononucléaires. Il s'agit notamment de:
- Lymphocytes (cellules T, cellules B, cellules NK)
- Monocytes
- Cellules dendritiques et
- Granulocytes basophiles.
Isolement / enrichissement des PBMC par centrifugation en gradient de densité
Le terme PBMC (peripheral blood mononuclear cells) est étroitement associé à l'isolement des cellules du sang périphérique sang total par le biais d'un Centrifugation en gradient de densité. Die Trennung der Blutbestandteile ist möglich, da sie verschiedene Dichten aufweisen; dies geschieht durch eine einstufige Zentrifugation in einem geeigneten Dichtegradientenmedium. Die Trenngrenze (Cut-Off) für die mononukleären Zellen liegt bei 1,077 g/ml.
Die dichtegradienten-angereicherten PBMC werden manchmal als Buffy Coat bezeichnet. In diesem Zusammenhang beschreibt Buffy Coat die Schicht der angereicherten Leukozyten in der Interphase. Für diesen speziellen Fall besteht der Buffy Coat nur aus mononukleären Zellen und ist in diesem Sinn ein spezieller Buffy Coat.
Les leucocytes polymorphonucléaires (à noyaux multiples et segmentés), tels que les granulocytes, sont appauvris dans cette fraction. Les granulocytes neutrophiles et éosinophiles ne peuvent pas être enrichis à partir d'une fraction PBMC préparée par séparation standard en gradient de densité (le milieu a une densité de 1,077 g/ml). Les granulocytes basophiles ont une densité différente et peuvent être partiellement retrouvés dans la fraction PBMC. Les érythrocytes sont fortement réduits par rapport au nombre initial de cellules.
Tout d'abord, une solution de polymère synthétique d'une densité définie est recouverte de sang ou d'un échantillon. Après la préparation, une étape de centrifugation a lieu. Dans l'interphase entre les deux solutions, les cellules s'accumulent à la densité correspondante. L'interphase contenant les PBMC est soigneusement éliminée. Les cellules mononucléaires enrichies sont ensuite lavées et utilisées pour d'autres applications.
Allgemeiner Ablauf einer PBMC Anreicherung mit Hilfe eines Dichtegradientenmediums
Zunächst wird eine synthetische Polymerlösung, mit einer definierten Dichte, mit Blut oder Probenmaterial überlagert. Nach der Vorbereitung erfolgt ein Zentrifugationsschritt. In der Interphase zwischen den beiden Lösungen reichern sich die Zellen mit der entsprechenden Dichte an. Die Interphase, die die PBMCs enthält, wird vorsichtig entfernt. Die angereicherten mononukleären Zellen werden anschließend gewaschen und für die weitere Anwendung verwendet.
Isolement / enrichissement des PBMC avec le milieu de centrifugation des PBMC
Le sang total est soigneusement superposée à la milieu de culture PBMC (2), qui est placé dans un tube à centrifuger. Il faut veiller à ce que les deux liquides ne se mélangent pas. Il est également possible d'utiliser des tubes pluriMate. La barrière pluriMate facilite la stratification et empêche le matériau de l'échantillon de se mélanger avec le milieu de densité.
Fig. 1 : Préparation de PBMC avec milieu de culture PBMC. L'échantillon (1) est soigneusement superposé sur le support de densité (2).
Lors de l'étape de centrifugation suivante, le taux réel de centrifugation en gradient de densitél'échantillon est séparé en différentes couches. Les cellules mononucléaires (2) sont enrichies entre le plasma (1) et le milieu de densité (3).
