PBMC - Célula mononuclear de sangre periférica
Una célula mononuclear de sangre periférica (CMSP) es una célula sanguínea con un único núcleo redondo. El término "periférico" se refiere a las células sanguíneas maduras que no se localizan en órganos hematopoyéticos como la médula ósea, sino que circulan por la sangre periférica.
NOTA: La sangre periférica es la que entra en los vasos sanguíneos tras su formación en la médula ósea y circula por ellos. En nuestro artículo:"La sangre total como material de partida para la separación celular". encontrará más información interesante sobre el tema de la sangre.
Entre los componentes principales de la sangre periférica se encuentran, además del plasma sanguíneo, que sirve como medio de transporte, los glóbulos rojos células sanguíneas (eritrocitos), glóbulos blancos (leucocitos) ) y Plaquetas (trombocitos).
Las PBMC, a veces denominadas PMNC (células mononucleares periféricas) o MNC (células mononucleares), comprenden todos los leucocitos mononucleares. Entre ellos se incluyen:
- Linfocitos (células T, células B, células NK)
- Monocitos
- Células dendríticas y
- Granulocitos basófilos.
Aislamiento/enriquecimiento de PBMC mediante centrifugación en gradiente de densidad
El término PBMC (células mononucleares de sangre periférica) está estrechamente asociado con el aislamiento de células de sangre entera a través de una Centrifugación en gradiente de densidadEs posible separar los componentes sanguíneos, ya que tienen densidades diferentes; esto se hace mediante centrifugación en un solo paso en un medio de gradiente de densidad adecuado. El punto de corte para las células mononucleares es de 1,077 g/ml.
Las PBMC enriquecidas por gradiente de densidad se denominan a veces «capa leucocitaria». En este contexto, la capa leucocitaria describe la capa de leucocitos enriquecidos en la interfase. En este caso concreto, la capa leucocitaria está compuesta únicamente por células mononucleares, por lo que se trata de una capa leucocitaria especial.
Los leucocitos polimorfonucleares (con núcleos multisegmentados), como los granulocitos, se encuentran deplecionados en esta fracción. Los granulocitos neutrófilos y eosinófilos no pueden enriquecerse a partir de una fracción de PBMC preparada mediante separación por gradiente de densidad estándar (el medio tiene una densidad de 1,077 g/ml). Los granulocitos basófilos difieren en densidad y pueden encontrarse parcialmente en la fracción de PBMC. El recuento de eritrocitos se reduce considerablemente en comparación con el recuento celular inicial.
Primero, se recubre una solución de polímero sintético con una densidad definida con sangre o muestra. Tras la preparación, se realiza una centrifugación. En la interfase entre las dos soluciones, las células se acumulan a la densidad correspondiente. La interfase que contiene las PBMC se retira cuidadosamente. Las células mononucleares enriquecidas se lavan y se utilizan para su posterior aplicación.
Proceso general de enriquecimiento de PBMC utilizando un medio de gradiente de densidad
En primer lugar, se recubre una solución de polímero sintético con una densidad definida con sangre o material de muestra. Tras la preparación, se lleva a cabo una centrifugación. Las células se acumulan en la interfase entre las dos soluciones a la densidad correspondiente. La interfase que contiene las PBMC se retira cuidadosamente. A continuación, las células mononucleares enriquecidas se lavan y se utilizan para otras aplicaciones.
Aislamiento/enriquecimiento de PBMC con medio de centrifugación de PBMC
El sangre entera se superpone cuidadosamente a la Medio de centrifugación PBMC (2), que se coloca en un tubo de centrífuga. Se debe tener cuidado para evitar que los dos líquidos se mezclen. Como alternativa, se pueden utilizar tubos pluriMate. La barrera pluriMate facilita la estratificación y evita que la muestra se mezcle con el medio de densidad.
Fig. 1: Preparación de PBMC con Medio de centrifugación PBMCEl material de muestra (1) se superpone cuidadosamente sobre el medio de densidad (2).
En el siguiente paso de centrifugación, el real centrifugación en gradiente de densidadLa muestra se separa en diferentes capas. Las células mononucleares (2) se enriquecen entre el plasma (1) y el medio de densidad (3).
