PBMC - 말초 혈액 단핵 세포
Eine periphere mononukleäre Blutzelle (Peripheral Blood Mononuclear Cell, PBMC) ist eine Blutzelle mit einem einzigen, runden Kern. Der Begriff „peripher“ bezeichnet ausgereifte Blutzellen, die sich nicht in blutbildenden Organen wie dem Knochenmark befinden, sondern im peripheren Blut zirkulieren.
NOTE: Unter peripherem Blut versteht man das Blut, das nach seiner Bildung im Knochenmark in die Blutgefäße gelangt und dort im Kreislauf zirkuliert.
Zu den Hauptbestandteilen des peripheren Blutes gehören neben dem Blutplasma, das als Transportmedium dient, auch rote Blutkörperchen (Erythrozyten), weiße Blutkörperchen (Leukozyten) ) 및 혈소판(혈전).
PMNC(말초 단핵 세포) 또는 MNC(단핵 세포)라고도 하는 PBMC는 모든 단핵 백혈구를 구성합니다. 여기에는 다음이 포함됩니다:
- 림프구(T세포, B세포, NK세포)
- 단핵구
- 수지상 세포와
- 호염성 과립구.
밀도 구배 원심분리를 통한 PBMC의 분리/농축
말초혈액 단핵구(PBMC)라는 용어는 다음에서 세포를 분리하는 것과 밀접한 관련이 있습니다 전혈 를 통해 밀도 구배 원심분리. Die Trennung der Blutbestandteile ist möglich, da sie verschiedene Dichten aufweisen; dies geschieht durch eine einstufige Zentrifugation in einem geeigneten Dichtegradientenmedium. Die Trenngrenze (Cut-Off) für die mononukleären Zellen liegt bei 1,077 g/ml.
Die dichtegradienten-angereicherten PBMC werden manchmal als Buffy Coat bezeichnet. In diesem Zusammenhang beschreibt Buffy Coat die Schicht der angereicherten Leukozyten in der Interphase. Für diesen speziellen Fall besteht der Buffy Coat nur aus mononukleären Zellen und ist in diesem Sinn ein spezieller Buffy Coat.
과립구와 같은 다형핵 백혈구(여러 개의 분절된 핵을 가진)는 이 분획에서 고갈됩니다. 호중구 및 호산구 과립구는 표준 밀도 구배 분리에 의해 준비된 PBMC 분획에서 농축할 수 없습니다(배지의 밀도는 1.077g/ml입니다). 호염기성 과립구는 밀도가 다르며 PBMC 분획에서 부분적으로 발견될 수 있습니다. 적혈구는 초기 세포 수에 비해 크게 감소합니다.
먼저, 밀도가 정해진 합성 폴리머 용액에 혈액 또는 시료 물질을 덮습니다. 준비 후 원심분리 단계가 진행됩니다. 두 용액 사이의 중간 단계에서 세포는 해당 밀도로 축적됩니다. PBMC가 포함된 중간상은 조심스럽게 제거됩니다. 그런 다음 농축된 단핵 세포를 세척하여 추가 적용에 사용합니다.
Allgemeiner Ablauf einer PBMC Anreicherung mit Hilfe eines Dichtegradientenmediums
Zunächst wird eine synthetische Polymerlösung, mit einer definierten Dichte, mit Blut oder Probenmaterial überlagert. Nach der Vorbereitung erfolgt ein Zentrifugationsschritt. In der Interphase zwischen den beiden Lösungen reichern sich die Zellen mit der entsprechenden Dichte an. Die Interphase, die die PBMCs enthält, wird vorsichtig entfernt. Die angereicherten mononukleären Zellen werden anschließend gewaschen und für die weitere Anwendung verwendet.
PBMC 스핀 배지를 사용한 PBMC의 분리/농축
그만큼 전혈 에 조심스럽게 오버레이됩니다 pBMC 스핀 미디어 (2)를 원심분리기 튜브에 넣습니다. 두 액체가 섞이지 않도록 주의해야 합니다. 또는 플루리메이트 튜브를 사용할 수도 있습니다. PluriMate 배리어는 레이어링을 용이하게 하고 시료 물질이 밀도 매질과 섞이는 것을 방지합니다.
그림 1: 다음을 사용한 PBMC 준비 pBMC 스핀 미디어. 샘플 재료(1)를 밀도 배지(2) 위에 조심스럽게 겹쳐 놓습니다.
다음 원심분리 단계에서는 실제 밀도 구배 원심분리샘플이 다른 층으로 분리됩니다. 단핵 세포(2)는 플라즈마(1)와 밀도 배지(3) 사이에서 농축됩니다.
