PBMC - Mononukleære celler i perifert blod
Eine periphere mononukleäre Blutzelle (Peripheral Blood Mononuclear Cell, PBMC) ist eine Blutzelle mit einem einzigen, runden Kern. Der Begriff „peripher“ bezeichnet ausgereifte Blutzellen, die sich nicht in blutbildenden Organen wie dem Knochenmark befinden, sondern im peripheren Blut zirkulieren.
NOTE: Unter peripherem Blut versteht man das Blut, das nach seiner Bildung im Knochenmark in die Blutgefäße gelangt und dort im Kreislauf zirkuliert.
Zu den Hauptbestandteilen des peripheren Blutes gehören neben dem Blutplasma, das als Transportmedium dient, auch rote Blutkörperchen (Erythrozyten), weiße Blutkörperchen (Leukozyten) ) og blodplader (trombocytter).
PBMC'er, også kaldet PMNC'er (perifere mononukleære celler) eller MNC'er (mononukleære celler), omfatter alle mononukleære leukocytter. Disse omfatter:
- Lymfocytter (T-celler, B-celler, NK-celler)
- Monocytter
- Dendritiske celler og
- Basofile granulocytter.
Isolering/berigelse af PBMC ved tæthedsgradientcentrifugering
Udtrykket PBMC (perifere mononukleære blodceller) er tæt forbundet med isolering af celler fra fuldblods gennem en Tæthedsgradient-centrifugering. Die Trennung der Blutbestandteile ist möglich, da sie verschiedene Dichten aufweisen; dies geschieht durch eine einstufige Zentrifugation in einem geeigneten Dichtegradientenmedium. Die Trenngrenze (Cut-Off) für die mononukleären Zellen liegt bei 1,077 g/ml.
Die dichtegradienten-angereicherten PBMC werden manchmal als Buffy Coat bezeichnet. In diesem Zusammenhang beschreibt Buffy Coat die Schicht der angereicherten Leukozyten in der Interphase. Für diesen speziellen Fall besteht der Buffy Coat nur aus mononukleären Zellen und ist in diesem Sinn ein spezieller Buffy Coat.
Polymorfonukleære leukocytter (med flere segmenterede kerner), såsom granulocytter, er udtømt i denne fraktion. Neutrofile og eosinofile granulocytter kan ikke beriges fra en PBMC-fraktion, der er fremstillet ved standard densitetsgradientseparation (mediet har en densitet på 1,077 g/ml). Basofile granulocytter har en anden densitet og kan delvist findes i PBMC-fraktionen. Erythrocytterne er stærkt reduceret i forhold til det oprindelige celletal.
Først overlejres en syntetisk polymeropløsning med en specifik tæthed med blod eller prøvemateriale. Efter forberedelsen finder et centrifugeringstrin sted. Cellerne med den tilsvarende tæthed ophobes i interfasen mellem de to opløsninger. Interfasen, der indeholder PBMC'erne, fjernes omhyggeligt. De berigede mononukleære celler vaskes derefter og bruges til yderligere anvendelse.
Allgemeiner Ablauf einer PBMC Anreicherung mit Hilfe eines Dichtegradientenmediums
Zunächst wird eine synthetische Polymerlösung, mit einer definierten Dichte, mit Blut oder Probenmaterial überlagert. Nach der Vorbereitung erfolgt ein Zentrifugationsschritt. In der Interphase zwischen den beiden Lösungen reichern sich die Zellen mit der entsprechenden Dichte an. Die Interphase, die die PBMCs enthält, wird vorsichtig entfernt. Die angereicherten mononukleären Zellen werden anschließend gewaschen und für die weitere Anwendung verwendet.
Isolering/berigelse af PBMC med PBMC Spin Medium
Den fuldblods vil blive omhyggeligt pBMC-spinmedium (2), som anbringes i et centrifugerør. Sørg for, at de to væsker ikke blandes. Alternativt kan der anvendes pluriMate-rør. PluriMate-barrieren letter stratificeringen og forhindrer, at prøvematerialet blandes med densitetsmediet.
Fig. 1: PBMC-præparat med pBMC-spinmedium. Prøvematerialet (1) placeres forsigtigt på densitetsmediet (2).
I det følgende centrifugeringstrin bliver den faktiske tæthedsgradient-centrifugeringprøven opdeles i de forskellige lag. De mononukleære celler (2) beriges mellem plasmaet (1) og densitetsmediet (3).
